公司新聞 | 弧菌檢測(cè)操作說(shuō)明
弧菌是菌體短小，彎曲成弧形，尾部帶一鞭毛的革蘭氏陰性菌?；【鷮?gòu)V泛分布于河口、海灣、近岸海域的海水和海洋動(dòng)物體內(nèi)。
弧菌是目前南美白對(duì)蝦養(yǎng)殖的頭號(hào)殺手，危害極大，學(xué)習(xí)如何采用“弧菌檢測(cè)套裝”進(jìn)行弧菌的快速有效檢測(cè)顯得非常必要。
原理
“弧菌檢測(cè)套裝”適合于弧菌的顯色觀察，一定量的被測(cè)試水樣或組織樣品，均勻的涂抹在制備好的培養(yǎng)皿上，培養(yǎng)一定的時(shí)間后顯示出明顯可見(jiàn)的色斑，經(jīng)過(guò)計(jì)數(shù)，計(jì)算出水體中每毫升弧菌的數(shù)量，也可定量判斷動(dòng)物組織中（如腸道、肝胰臟）中的弧菌含量。每份套裝包括：真空包裝的培養(yǎng)皿、無(wú)菌滴管、無(wú)菌涂棒。
操作方法
培養(yǎng)皿：開(kāi)封使用前應(yīng)保存于陰涼處，有條件最好冷藏（4℃）保存。
測(cè)試樣操作（最好在超凈臺(tái)或比較干凈的環(huán)境中進(jìn)行，戴上衛(wèi)生手套避免污染干擾）：用滴管取養(yǎng)殖水樣（每個(gè)滴管用一個(gè)水樣），滴加到培養(yǎng)皿上3滴（共約0.1mL），然后用L型涂棒（每個(gè)涂棒用一個(gè)水樣）涂抹均勻，加蓋，平放1-2小時(shí)后倒置。最好置于26 ℃恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。
如果需要測(cè)定特定組織中（如肝胰腺、腸道）中的弧菌數(shù)量，則需要取一定數(shù)量的該組織，放在裝有無(wú)菌生理鹽水的小管中勻漿，然后按照上述步驟培養(yǎng)和計(jì)數(shù)。
弧菌計(jì)數(shù)：顯色后的培養(yǎng)皿上出現(xiàn)可見(jiàn)的顏色和直徑有區(qū)別的色斑，是不同弧菌特性的顯色表現(xiàn)，通過(guò)計(jì)數(shù)每個(gè)平板上的平均色斑，再乘以10，即可計(jì)算出水樣中的弧菌數(shù)量(個(gè)/mL)。如果對(duì)結(jié)果存疑，可將一個(gè)水樣平行做三個(gè)培養(yǎng)基，取計(jì)數(shù)的平均值。
指標(biāo)判定
一般養(yǎng)殖水體中弧菌低于100 個(gè)/mL一般被認(rèn)為是安全指標(biāo)，而超過(guò)1000個(gè)/mL時(shí)，就很容易出現(xiàn)大面積發(fā)病，因此，將總弧菌數(shù)1000個(gè)/mL作為警示指標(biāo)。據(jù)實(shí)際觀察，在合適的溫度和有機(jī)質(zhì)比較豐富的水體中，弧菌數(shù)量由500個(gè)/mL到1000個(gè)/mL只需要2天的時(shí)間，所以，控制弧菌數(shù)量應(yīng)該在500個(gè)/mL或更低的時(shí)候進(jìn)行。
特別提示
近年在各地爆發(fā)的“急性肝胰臟壞死綜合癥AHPNS”,多數(shù)認(rèn)為病原為副溶血弧菌或與其密切相關(guān)，而副溶血弧菌在本培養(yǎng)皿上呈綠色菌落，監(jiān)控時(shí)應(yīng)格外注意，一般要求綠色菌落最好不要超過(guò)30-50個(gè)/mL。
應(yīng)用案例
首先，在放苗前三天應(yīng)檢測(cè)水體中的弧菌數(shù)量，根據(jù)結(jié)果進(jìn)行必要的處理，以確保水體安全。其次，南美白對(duì)蝦在養(yǎng)殖20天后，隨著生長(zhǎng)和投餌量迅速的增加，產(chǎn)生大量的有機(jī)廢物，超出了水體自身的凈化能力，給弧菌營(yíng)造了適宜的營(yíng)養(yǎng)溫床，使對(duì)蝦容易感染弧菌疾病，表現(xiàn)黑鰓、黃鰓、黑斑、紅肢、爛眼、短須、空腸空胃等癥狀，會(huì)出現(xiàn)大量的游塘、趴邊和死亡。建議在養(yǎng)殖過(guò)程每周檢測(cè)水體中弧菌量，當(dāng)弧菌數(shù)量上升至300個(gè)/mL時(shí)，提前用綠色殺菌劑和微生物制劑配合處理，能維持弧菌量在較低的水平和較長(zhǎng)的周期；如果超過(guò)500個(gè)/mL，則最好先使用消毒劑，2天后使用微生態(tài)制劑；維持水質(zhì)，嚴(yán)格控制弧菌量在1000個(gè)/mL以下。特別在養(yǎng)殖30天以后，更應(yīng)注意弧菌數(shù)量的變化，做到預(yù)防為主。
（飼料事業(yè)部 潘恒偉）